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淀粉的含量測定-酶水解法


  酶水解法
  一、目的與要求:
  1、明確與掌握各類食品中淀粉含量的原理及測定方法。
  2、掌握用酶水解法和酸水解法測定淀粉的方法。
  二、原理
  樣品經除去脂肪及可溶性糖類后,其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖,再用鹽酸將雙糖水解成單糖,最后按還原糖測定,并折算成淀粉。
  三、試劑:
  1、0.5%淀粉酶溶液:稱取淀粉酶0.5克,加100毫升水溶解,數滴甲苯或三氯甲烷,防止長霉,貯于冰箱中。
  2、碘溶液:稱取3.6克碘化鉀溶于20毫升水中,加入1.3克碘,溶解后加水稀釋至100毫升。
  3、乙醚
  4、85%乙醇
  5、6N鹽酸:量取50毫升鹽酸加水稀釋至100毫升。
  6、甲基紅指示液:0.1%乙醇溶液。
  7、20%氫氧化鈉溶液。
  8、堿性酒石酸銅甲液:稱取34.639克硫酸銅(CuS04·5H2O)。加適量水溶解,加0.5毫升硫酸,再加水稀釋至500毫升,用精制石棉過濾。
  9、堿性酒石酸銅乙液:稱取173克酒石酸鉀鈉與50克氫氧化鈉,加適量水溶解,并稀釋至500毫升,用精制石棉過濾,貯存于橡膠塞玻璃瓶內。
  10、0.1000N高錳酸鉀標準溶液。
  11、硫酸鐵溶液:稱取50克硫酸鐵,加入200毫升水溶解后,人100毫升硫酸,冷后加水稀釋至1000毫升。
  四、操作方法:
  1、樣品處理:
  稱取2-5克樣品,置于放有折疊濾紙的漏斗內,先用50毫升乙醚分5次洗除脂肪,再用約100毫升85%乙醇洗去可溶性糖類,將殘留物移入250毫升燒杯內,并用50毫升水洗濾紙及漏斗,洗液并入燒杯內,將燒杯置沸水浴上加熱15分鐘,使淀粉糊化,放冷至60℃以下,加20毫升淀粉酶溶液,在55-60℃保溫1小時,并時時攪拌。然后取1滴此液加1滴溶液,應不顯現藍色,若顯藍色,再加熱糊化并加20毫升淀粉酶溶液,繼續保溫,直至加碘不顯藍色為止。加熱至沸,冷后移入250毫升容量瓶中,并加水至刻度,混勻,過濾,棄去初濾液。取50毫升濾液,置于250毫升錐形瓶中,并加水至刻度,沸水浴中回流1小時,冷后加2滴甲基紅指示液,用20%氫氧化鈉溶液中和至中性,溶液轉入100毫升容量瓶中,洗滌錐形瓶,洗液并人100毫升容量瓶中,加水至刻度,混勻備用。
  2、測定:
  吸取50毫升處理后的樣品溶液,于400毫升燒杯內,加入25毫升堿性酒石酸銅甲液及25毫升乙液,于燒杯上蓋一表面皿,加熱,控制,在4分鐘內沸騰,再準確煮沸2分鐘,趁熱用鋪好石棉的古氏坩堝或c4垂融坩堝抽濾,并用60℃熱水洗滌燒杯及沉淀,至洗液不呈堿性為止。將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400毫升燒杯中,加25毫升硫酸鐵溶液及25毫升水,用玻棒攪拌使氧化亞銅完全溶解,以0.1000N高錳酸鉀標準溶液滴定至微紅色為終點。
  同時量取50毫升水及與樣品處理時相同量的淀粉酶溶液,按同一方法
  做試劑空白實驗。
  計算:X1=((A1-A2)×0.9)/(m1×50/250×V1/100×1000)×100
  X1:樣品中淀粉的含量,%;
  A1:測定用樣品中還原糖的含量,mg;
  A2:試劑空白中還原糖的含量,mg;
  0.9:還原糖(以葡萄糖計)換算成淀粉的換算系數;
  m1:稱取樣品質量,g;
  V1:測定用樣品處理液的體積,毫升(m1)。
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